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牛ELISA检测试剂盒标本样品操作步骤要求

发布时间:2017-11-21   点击次数:2328次
  牛ELISA检测试剂盒标本样品操作步骤要求
  
  牛ELISA检测试剂盒标本要求
  
  1.牛ELISA检测试剂盒标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
  
  2.牛ELISA检测试剂盒不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
  
  牛ELISA检测试剂盒标准品操作步骤
  
  1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
  
  1200μg/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
  
  600μg/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
  
  300μg/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
  
  150μg/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
  
  75μg/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
  
  2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  
  3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  
  4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
  
  5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  
  6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  
  7.温育:操作同3。
  
  8.洗涤:操作同5。
  
  9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  
  10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  
  11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。