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大鼠ELISA检测试剂盒固体样本处理原则操作流程

发布时间:2018-06-25   点击次数:733次
   大鼠ELISA检测试剂盒固体样本处理原则操作流程
  
  大鼠ELISA检测试剂盒固体样本处理原则:称取1g的固体样本,用9g的缓冲液溶解,蛋白可以直接离心取上清检测,细胞内的蛋白,要先收集细胞,再用破碎,离心取上清。
  
  1、组织标本:切割标本后,称取1g组织,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存中如有沉淀形成,应再次离心。对于植物组织,不好匀浆的话,就在液氮中充分研磨;
  
  2、大鼠ELISA检测试剂盒细胞内蛋白样本
  
  许多待测蛋白不是蛋白,而是存在于细胞内的蛋白,这个时候,要先收集细胞,洗涤干净,再破碎细胞,离心取上清。
  
  大鼠ELISA检测试剂盒操作流程如下:
  
  (1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
  
  (2)酶标板置4℃,包被过夜。
  
  (3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
  
  (4)阴性对照孔每孔加入PBS50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
  
  (5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  
  (6)洗板,同(4)。
  
  (7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液100μl。
  
  (8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  
  (9)洗板,同(4)。
  
  (10)每孔加TMB显色液100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
  
  (11)每孔加100μl2mol/LH2SO4终止反应。
  
  (12)分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,zui终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
  
  (13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
  
  
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