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猪ELISA检测试剂盒在实验中一定要多注意以下事项

发布时间:2020-06-26   点击次数:232次
  猪ELISA检测试剂盒的实验原理:
  用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
 
  猪ELISA检测试剂盒的样品收集、处理及保存方法:
  1、血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,10×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
  2、血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
  3、细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
  4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
  5、保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
 
  注意事项:
  1、严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
  2、洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
  3、消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
  4、底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
  5、避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
  6、在储存和温育时避免强光直接照射。
  7、平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
  8、任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
  9、不能使用过期产品。
  10、如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。
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