欢迎来到上海仁捷生物科技有限公司网站!
技术文章您现在的位置:首页 > 技术文章 > 细说鸡elisa检测试剂盒的操作方法和注意事项

细说鸡elisa检测试剂盒的操作方法和注意事项

发布时间:2020-07-23   点击次数:1461次
  鸡elisa检测试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被昆虫捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的昆虫呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
 
  操作方法:
  1、包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。
  2、加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。
  3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
  4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
  5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
  6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
 
  操作注意事项:
  1、鸡elisa检测试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶*溶解后再使用;
  2、实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存;
  3、浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,Zui终结果乘以5才是样本实际浓度;
  4、严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作;
  5、所有液体组分使用前充分摇匀。