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猪ELISA检测试剂盒基本原理与蔗糖封闭原理分析

发布时间:2021-04-25   点击次数:1196次
  猪ELISA检测试剂盒基本原理:
 
  ①抗原或抗体能吸附到固相载体表面,并保持其免疫学活性;
 
  ②抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,仍保持其免疫学和酶学活性;
 
  ③酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。
 
  猪ELISA检测试剂盒说明上写封闭液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封闭空白位点,蔗糖封闭的原理:
 
  1、实验中,蔗糖本身没有封闭作用;
 
  2、封闭液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
 
  3、加蔗糖的主要目的是保护ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保护剂"的作用。
 
  4、蔗糖溶液一般在ELISA板子经过BSA封闭后加,当然也有将蔗糖加到封闭液中同时进行处理;那一种更好需要你实验后来验证。但多数选择前者。
 
  封闭剂还可用5%的脱脂乳(市售即可),0.4%的明胶,但是实验表明前者比较好,后者不容易洗干净未结合上的明胶。
 
  封闭剂的原理就是与酶联板上未结合抗原或抗体的微孔中用封闭剂封闭上,结合抗体或抗原的时候就不会产生非特异结合了,不会影响。
 
  tween的作用:虽然不能单独封闭,但和BSA在封闭时会起到清洗非特异性结合或结合不牢固的蛋白的作用,假如抗体包被在板上会出现YY-
 
  猪ELISA检测试剂盒实验中是以抗原和抗体的免疫反应为基础,ELISA试剂以及各种溶液如何配置?zui近刚做了下ELISA实验,把各种ELISA配置方法汇总如下:
 
  (1) ELISA实验包被缓冲液;
 
  (2) ELISA实验洗涤缓冲液;
 
  (3) ELISA实验稀释液;
 
  (4)ELISA实验终止液;
 
  (5)ELISA底物缓冲液;
 
  (6)ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液;
 
  (7) ELISA实验ABTS使用液(8)ELISC;
 
  值得一提的是有的封闭液中含有脱脂奶粉,不适合长期保存。