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分享!植物elisa检测试剂盒的实验步骤和注意事项

发布时间:2022-12-27   点击次数:939次
  在植物elisa检测试剂盒检测中除了包被外,一般需进行45加样。在定性测定中有时不强调加样量的准确性,例如规定为加样一滴。此时应该使用相同口径的滴管,保持准确的加样姿势,使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中则加样量应力求准确。标本和结合物的稀释液应按规定配制。加样时应将液体加在孔底,避免加在孔壁上部,并注意不可出现气泡。
 
  植物elisa检测试剂盒的实验操作步骤:
  1、把试剂混匀,切记实验时不要加理大量含有泡沫的液体,避免实验产生误差。
  2、跟数据测样决定板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
  3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔 加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
  4、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
  6、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  7、每孔加入底物各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。一定要避免光照。
  8、取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
  9、在450nm波长处测定各孔的OD值。
 
  操作注意事项:
  1、试剂应按标签说明储存,使用前恢复到室温.稀稀过后的标准品应丢弃;
  2、实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存;
  3、用干净的塑料容器配置洗涤液,用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品;
  4、洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水;
  5、底物A应挥发避免长时间打开盖,底物B对光敏感避免长时间暴露于光下;
  6、加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。